Культивирование эмбрионов: подготовка и техника проведения

Культивирование эмбрионов

Процесс культивирования эмбрионов непосредственно относится к процедуре искусственного оплодотворения. На сегодняшний день, бесплодие одного из партнёров больше не является окончательным вердиктом в вопросе возможности иметь детей, так как, благодаря достижениям медицины, доступными являются процедуры оплодотворения яйцеклеток в искусственных условиях, в том числе, метод экстракорпорального оплодотворения (метод ЭКО).

Именно ЭКО считается одним из наиболее эффективных способов зачатия ребёнка парами, в которых, в силу наличия некоторых патологий или заболеваний, женщина не может зачать или выносить плод, или же мужчина имеет репродуктивные проблемы. Такой способ является методом преодоления бесплодия, но он не лечит его.

Общее понятие об ЭКО: этапы процедуры, показания к назначению

Экстракорпоральное оплодотворение подразумевает, что само зачатие происходит не в женском организме, а в условиях лаборатории. Если в силу определённых обстоятельств женщина не может забеременеть, а устранение этих факторов затруднено или невозможно, ЭКО даёт высокие шансы выносить и родить малыша даже с наличием некоторых проблем со здоровьем у мужчины или у женщины.

ЭКО назначается в случаях, когда у пациентки диагностирована непроходимость маточных труб, либо если они были удалены, если у мужчины отмечается низкое количество или малая активность сперматозоидов, или же если ранее осуществлялось 2-4 цикла стимуляции овуляции или внутриматочной инсеминации, но они прошли безуспешно.

Если у женщины выявлено малое количество яйцеклеток, этот фактор может быть показанием к проведению ЭКО с использованием донорских яйцеклеток.

ЭКО эффективно и при эндометриозе – заболевании, вызывающем неконтролируемое разрастание слизистой оболочки матки.

Вся процедура является достаточно сложной и длительной, она осуществляется в несколько этапов, расположенных в строгой последовательности.

Изначально пара проходит общее клинико-биохимическое обследование, чтобы обнаружить наличие показаний или противопоказаний к ЭКО. Следующим шагом является разработка протокола ЭКО – под этим термином понимается режим введения гормональных препаратов, призванных стимулировать яичники на выработку яйцеклеток. Препараты могут вводиться перорально, внутривенно, внутримышечно, обязательно в строго определённом порядке и под наблюдением доктора.

Как только яйцеклетки созревают, их извлекают хирургическим путём, и подвергают оплодотворению мужской спермой в лабораторных условиях.

Следующий этап – культивирование эмбрионов в стерильной среде инкубатора. В среднем, этот период занимает от 2 до 6 дней. Всё это время оплодотворённые яйцеклетки находятся под наблюдением специалистов-репродуктологов.

По достижению эмбрионами нужной стадии развития, они переносятся в полость матки женщины. Обычно в матку вживляются два эмбриона, второй переносится туда спустя некоторое время после первого, чтобы увеличить вероятность беременности.

Далее медики переходят к поддержке лютеиновой фазы менструального цикла – этапа, когда организм производит гормональную подготовку матки к беременности.

Суть процесса культивирования эмбрионов

Процесс культивирования представляет собой создание условий для оплодотворения яйцеклетки, а также наблюдение за развитием из неё эмбрионального организма. Особенность этого процесса заключается в том, что клеточное развитие происходит не в естественных условиях, а в искусственно созданной среде. Состав и качество такой среды идентичны содержимому маточных труб, состоянию стенок и полости матки.

Как происходит подготовка к забору (пункции) яйцеклеток

Культивирование эмбрионов подразумевает необходимость физического изъятия яйцеклетки из яичника женщины. Подобная процедура требует обязательной подготовки, правила которой женщина начинает соблюдать заранее. За пять дней следует избегать половых актов, отказаться от употребления спиртного, жареной, копчёной, жирной пищи. Запрещено посещать баню, сауну, принимать горячие ванны.

Накануне процедуры следует:

• отказаться от ужина (кушать разрешено не позже 17:30);
• снять лак или любое покрытие с ногтевых пластин;
• не употреблять жидкость после 24:00.

Утром перед пункцией запрещено курить, кушать, пить, жевать жевательную резинку. Если женщина носит контактные линзы, на время операции их лучше не надевать.

Дата проведения процедуры должна соотноситься со временем естественной овуляции.

Техника проведения пункции яйцеклеток

По сути, процедура не особенно отличается от трансвагинального УЗИ. Во влагалище пациентке вводится специальный датчик, который выводит на экран аппарата изображение. Однако, в отличие от УЗИ, датчик имеет специальную насадку – устройство для пунктирования.

Пациентку могут погрузить в состояние медикаментозного сна, или осуществить местное обезболивание, так как сама по себе процедура причиняет некоторый дискомфорт и болевые ощущения.

Проведя осмотр близлежащих органов, медик изучает состояние, размеры и расположение яичников непосредственно перед пункцией.

Далее доктор, используя направляющую линию датчика, определяет точность попадания пункционной иглы в фолликул. После этого, из устройства выдвигается сама игла, которая прокалывает стенку влагалища и фолликул.

Прибор всасывает в себя содержимое фолликула по такому же принципу, как происходит забор крови из вены – давлением воздуха. Аспирационная игла втягивается в прибор, после чего он извлекается из влагалища. Содержимое фолликула, вместе с яйцеклеткой, определяется в специальную стерильную пробирку. Процедура повторяется, пока нужное количество яйцеклеток не будет изъято из фолликула.

Весь процесс обычно длится 10-15 минут. Если же у женщины присутствует большое количество созревших яйцеклеток, процедура пункции может продолжаться и 40-50 минут.

В следующие два дня после операции, женщина может ощущать слабость, тянущие боли в нижней части живота, сонливость. Допускаются незначительные кровянистые выделения из влагалища.

Этап культивирования эмбрионов в процессе осуществления ЭКО

После забора яйцеклеток, их подвергают оплодотворению – обычно это происходит через несколько часов после пункции. С момента, когда доктор проводит оценку факта наступления оплодотворения, отсчитывается начало этапа культивирования. День процедуры пункции фолликулов считается нулевым.

В целом, этап культивирования занимает до шести дней.

Первый день. Доктор осматривает ооциты (яйцеклетки, которые подвергались оплодотворению). У большинства из них уже обнаруживаются признаки успешного оплодотворения. Однако, из всех наличествующих ооцитов, примерно 10-15% являются непригодными для дальнейшей культивации, так как являются незрелыми или имеют дегенеративные формы.

Через 16-20 часов после инсеминации у яйцеклеток наблюдается стадия презиготы: в клетке уже присутствуют мужской и женский типы генетического материала, которые ещё не слились в единое целое. В таком случае считается, что оплодотворение прошло успешно.

Существуют случаи, когда одну яйцеклетку оплодотворяют два и более сперматозоида – такие зародыши отбраковываются и не участвуют в дальнейшем в процессе культивации. Возможно и полное отсутствие результата инсеминации, когда не оплодотворяется ни одна яйцеклетка.

В этот период времени оплодотворённую клетку могут подвергнуть консервации. Крайне редко в первый день осуществляется перенос зиготы в женский организм: во-первых, на этой стадии эмбрион ещё должен некоторое время находиться в маточных трубах, а не в матке, во-вторых, медики предпочитают ждать наступления этапа естественной выбраковки эмбрионов, а также проявления у них любых показателей, по которым можно отобрать наиболее удачный для дальнейшей беременности эмбрион.

Второй день. В оплодотворённых яйцеклетках происходит их дробление на две части – бластомеры. В этот период медики уже могут оценить качество зародыша по соотношению объёма зародыша к безъядерным фрагментам в цитоплазме. Клетки, в которых количество безъядерных элементов превышает по объёму сам зародыш, считаются материалом с низким потенциалом к имплантации.

Если на второй день возможно отобрать одну или две яйцеклетки подходящего качества, их могут уже вживить в женский организм.

Третий день. В это время количество оплодотворённых бластомеров приближается к 6-8 клеткам. В течении первых двух дней развитие эмбриона происходило за счёт ресурсов, накопленных яйцеклеткой в период её созревания в яичнике. Если у клетки присутствуют хромосомные патологии, на третий день она останавливается в развитии, то есть в действие вступает так называемый процесс естественной отбраковки.

Долгое время с момента изобретения метода ЭКО, трансплантация эмбриона происходила именно в этот день, так как более длительный процесс культивирования был недоступен из-за несовершенства существующей на тот момент лабораторной техники. Сейчас эта проблема решена развитием более современных технологий ЭКО.

Четвёртый день. Количество бластомеров доходит до 16 штук. В этот период начинается процесс компактизации клеток. Он заключается в том, что межклеточные контакты уплотняются, а поверхность эмбриона сглаживается. Четвёртый день характеризуется также началом стадии морулы. В женском организме в это время зародыш переходит по маточным трубам в полость матки. Именно поэтому имплантация эмбриона часто происходит именно в такой момент. В конце четвёртого дня в моруле образуется полость.

Пятый и шестой день. Зародыш переходит в стадию бластоцисты, когда объём внутренней полости морулы достигает более 50% общего её объёма. Бластоциста состоит из трофэктодермы и эмбриобласта.

Трофэктодерма относится к внешнему слою эмбриона – она отвечает за его прикрепление к эпителию матки. Эмбриобласт формирует начальное развитие тело плода, и представляет собой совокупность клеток внутри трофэктодермического пузыря.

На этом заключительном этапе процесса культивации у медиков есть возможность оценить качество бластоцисты по размеру её полости, по степени развития её составных частей (трофэктодермы и эмбриопласта).

Наиболее эффективно имплантация зародыша осуществляется именно на пятый или шестой день культивации.

По статистике, каждый второй эмбрион шестого дня помещается в матку с дальнейшим успешным исходом. Таким образом удаётся избежать проявлений многоплодия и переноса большого количества эмбрионов в матку для увеличения степени успешности процедуры ЭКО.

Криокультивация эмбрионов: процесс консервации

В некоторых случаях инсеминация яйцеклеток даёт больше 2-3 успешно оплодотворённых зародышей. В случае, если их количество достигает 8-10 штук, медики могут рекомендовать заморозить их. Если первая процедура ЭКО пройдёт неудачно, у пары уже будет материал для следующей попытки.

Для заморозки подходят яйцеклетки, только что прошедшие процесс оплодотворения, бластоцисты, а также четырёх- и восьмиклеточные эмбрионы.

Процесс переноса ранее замороженных яйцеклеток требует некоторой подготовки, при этом пункция и стимуляция яичников исключается. Для женщин с нормальным менструальным циклом и овуляцией, перенос законсервированных зародышей назначается на 7-10 день с начала цикла овуляции.

Если же цикл нарушен, сперва его восстанавливают посредством проведения гормональной терапии.

Проведение ЭКО с использованием замороженных клеток несколько снижает шансы успешного достижения беременности.

Успешность лабораторного этапа ЭКО, в том числе, процесса культивации эмбрионов, зависит от качества исходного биологического материала – сперматозоидов и яйцеклеток, а также от опыта и квалификации медиков, осуществляющих процесс культивации. Культивация занимает до 6 дней, при этом наиболее успешно проходит имплантация, осуществлённая именно на пятый или шестой день развития зародыша.

Как проходит ЭКО поэтапно

Этап 1: Диагностика бесплодия

Диагноз бесплодие ставится при отсутствии беременности в течение 1 года регулярной половой жизни без использования контрацепции. Если женщине более 35 лет, этот срок уменьшается до 6 месяцев. Следовательно, при отсутствии беременности в течение 1 года у женщин до 35 лет и 6 месяцев у женщин старше 35 лет необходимо обратиться к врачу-репродуктологу.

Причины бесплодия могут быть связаны с нарушениями здоровья как у женщин, так и у мужчин. Среди возможных причин женского бесплодия могут быть:

• Отсутствие овуляции (например, при синдроме поликистозных яичников, преждевременном истощении яичников);
• Непроходимость маточных труб;
• Заболевания матки (эндометриоз, миома матки, пороки развития матки);
• Заболевания шейки матки (цервицит, сужение канала шейки матки);
• Иммунологические нарушения (например, наличие антиспермальных антител);
• Бесплодие неясного происхождения;
• Сочетанное бесплодие (при наличии как женского, так и мужского факторов).

К причинам мужского бесплодия относят:

• Различные врожденные аномалии яичек (гипогонадизм или недоразвитие яичек, крипторхизм или неопущение яичек в мошонку, врожденное отсутствие яичек);
• Бесплодие, связанное с воздействием вредных факторов (инфекций, радиации, длительное охлаждение);
• Травмы;
• Варикоцеле (расширение вен семенного канатика и яичка);
• Бесплодие неясного происхождения

Этап 2: Подготовка к ЭКО

ЭКО – это сложная и многоэтапная процедура, которая требует как физической, так и моральной подготовки. На консультации доктор обязательно рекомендует вам подготовить организм к беременности. А это значит отказаться от всех вредных привычек, распределить физические нагрузки и полноценно питаться.

Психологическая подготовка наиболее важна. Необходимо настроиться на многоэтапное лечение и быть готовым к возможному неудачному исходу. Самое важное во время процедуры это позитивный настрой и вера в успех!

Для того, чтобы убедиться в возможности проведения процедуры ЭКО, как мужчина, так и женщина должны пройти ряд обследований и сдать анализы.

Список необходимых обследований для пациентов, вступающих в программу ЭКО, утвержден приказом Минздрава РФ №107н от 30.08.2012. Ниже приведен их полный список.

Анализы для мужчин

• Спермограмма. Делается после полового воздержания в течение 3-5 дней. За 10 дней до сдачи анализа необходимо исключить алкоголь, антибиотики и тепловые процедуры. Анализ действителен в течение 6 месяцев;
• Мазок на флору из уретры. Действителен 1 мес;
• Мазки на инфекции: хламидии, цитомегаловирус, герпес, генитальные уреаплазмы и микоплазмы. Действительны 6 мес;
• Анализы крови на ВИЧ, гепатиты В и С, сифилис. Действительны 3 мес.

Анализы для женщин

• Консультация эндокринолога;
• Исследование маточных труб на проходимость c помощью гистеросальпингографии, ультразвуковой гистероальпингоскопии или лапароскопии;
• Группа крови и резус-фактор. Бессрочный;
• Клинический анализ крови. Действителен 1 мес;
• Гемостазиограмма (коагулограмма). Действителен 1 месяц;
• Биохимический анализ крови. Действителен 1 месяц;
• Общий анализ мочи. Действителен 1 месяц;
• Анализ крови на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С. Действительны 3 месяца;
• Анализ крови на гормоны: ФСГ, ЛГ, эстрадиол, пролактин, тестостерон, ТТГ, Т4 свободный, ДГЭА, АМГ (на 2-3 день менструального цикла. Прогестерон на 21-й день цикла.) Действительны 6 мес;
• Исследования крови на TORCH (IgM, IgG к токсоплазме, вирусу краснухи, цитомегаловирусу, вирусу простого герпеса). Действительны 6 месяцев;
• Мазок на флору из цервикального канала и степень чистоты влагалища. Действителен 1 месяц;
• Цитологическое исследование соскоба с шейки матки. Действителен 1 год;
• Мазки на инфекции: хламидии, цитомегаловирус, герпес, генитальные уреаплазмы и микоплазмы. Действительны 6 мес;
• Заключение терапевта о состоянии здоровья и возможности вынашивания беременности. Действительно 1 год;
• Флюорография или рентген лёгких. Действительна 1 год;
• ЭКГ. Действительна 1 месяц;
• Ультразвуковое исследование молочных желез у пациенток до 35 лет, после 35 лет маммография. Действительно 1 год;
• Заключение маммолога о возможности стимуляции яичников.

При необходимости врач может назначить дополнительные исследования.

На сегодняшний день центр репродукции и генетики Нова Клиник – одна из ведущих клиник, занимающихся решением проблем бесплодия. Центр объединяет специалистов высочайшего уровня, знаний, навыков с целью обеспечения качественной медицинской помощи в лечении бесплодия.

В центре репродукции и генетики Нова Клиник используются только современные методики лечения с доказанной эффективностью. Эмбриологическая лаборатория центра имеет сертификат внешней оценки качества Великобритании NEQAS, что гарантирует высокое качество эмбриологического этапа ЭКО.

Этап 3: Стимуляция суперовуляции

Для того, чтобы получить больше яйцеклеток для последующего оплодотворения проводят стимуляцию яичников. Этот процесс также называется «стимуляцией суперовуляции».

Чтобы добиться созревания большего количества яйцеклеток назначают ежедневные инъекции гонадотропинов – гормонов, которые приводят к созреванию сразу нескольких яйцеклеток, а не одной, как при обычном менструальном цикле.

Длительность этого этапа зависит от выбора протокола стимуляции. Пункция фолликулов обычно приходится на 12-14 день, реже на 13-18 день цикла. Режим стимуляции (протокол, дозы препаратов) подбираются индивидуально. Контроль созревания фолликулов происходит под контролем УЗИ. Стимуляция овуляции проходит под тщательным контролем врача.

Основная цель Нова Клиник – помочь бесплодной паре стать родителями здорового ребенка. Все методы обследований, назначаемые докторами центра, клинически обоснованы и регламентированы приказом Минздрава РФ.

В центре применяется ЭКО с персонифицированной стимуляцией овуляции. При этой процедуре врач, согласно результатам специального анализа на основе фармакогенетики, подбирает индивидуальную схему стимуляции.

Этап 4: Пункция фолликулов

При достижении фолликулами зрелости необходимо сделать специальный укол – ввести триггер финального созревания яйцеклеток. Пункция фолликулов и получение яйцеклеток проводится через 35-36 часов после введения триггера, только по истечению этого времени возможно получить зрелые яйцеклетки.

Процедура проводится под наркозом и контролируется с помощью УЗИ. Врач с помощью специальной иглы проводит забор фолликулярной жидкости и передает материал эмбриологу. Эмбриолог отбирает яйцеклетки для дальнейшего оплодотворения. Чем больше яйцеклеток будет получено, тем лучше. Неиспользованные в протоколе яйцеклетки могут быть заморожены на несколько лет и использованы в повторной попытке ЭКО.

Этап 5: Оплодотворение яйцеклеток

Полученные яйцеклетки и сперматозоиды помещают в специальный инкубатор, в питательный раствор при температуре 37° С и высокой влажности. Здесь и происходит оплодотворение.

В некоторых случаях эмбриологи прибегают к интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в яйцеклетку (ИКСИ). При этой методике эмбриолог отбирает наиболее перспективный сперматозоид и внедряет его в цитоплазму яйцеклетки. К процедуре прибегают при низком качестве эякулята или яйцеклеток или использовании «замороженных» яйцеклеток.

Этап 6: Культивирование эмбрионов

Этап 7: Перенос эмбрионов

Этап 8: Контроль и поддержка беременности

Популярные вопросы и ответы

Кому подходит

Новые технологии

Как часто бывают неудачные попытки

ЭКО, конечно же, не гарантирует стопроцентное наступление беременности. В настоящее время эффективность ЭКО составляет около 30-35% у пациенток в возрасте младше 35 лет. В возрасте старше 35 лет этот процент составляет менее 30%. Поэтому неудачные попытки ЭКО встречаются, увы, довольно часто. Больше половины пациентов после первой попытки уходят из клиники, к сожалению, с отрицательным результатом.

С возрастом естественная фертильность женщины снижается. Особенно заметно это происходит после 38 лет. Точно так же с возрастом будет снижаться и частота успешных циклов ЭКО. По мнению врачей, все дело в том, что с увеличением возраста у женщины созревает меньшее количество яйцеклеток и эти яйцеклетки худшего качества, что при оплодотворении способствует образованию генетически нездоровых эмбрионов.

Возраст мужчины также влияет на успешность ЭКО, но в гораздо меньшей степени.
Также на исход процедуры влияет количество полученных ооцитов, овариальный запас женщины.

Результативность программ ЭКО в Центре репродукции и генетики Нова Клиник составляет 53%. И это выше вероятности беременности при естественном зачатии у здоровой пары, составляющей 25% в расчете на цикл.

Индивидуальные схемы индукции овуляции, включая методики минимальной стимуляции и модифицированные протоколы, позволяют проводить процедуры ЭКО, сводя к минимуму возможность осложнений и повышая эффективность терапии.

Сколько стоит процедура и кто оплачивает

«В нашей стране возможно бесплатное проведение программы ЭКО за счёт средств обязательного медицинского страхования», – отмечают врачи гинекологи-репродуктологи – «Права на ЭКО по ОМС имеет женщина с диагнозом бесплодие, как состоящая в официальном браке, так и с партнером вне брака. А также одинокая женщина с диагнозом бесплодие, или женщина, супругу (партнёру) которой выставлен диагноз бесплодие.

В процедуре ЭКО по полису ОМС может быть отказано по некоторым причинам: при низком овариальном резерве, т.е. когда в яичниках мало яйцеклеток, и для наступления беременности требуются донорские яйцеклетки.

По полису ОМС бесплатно возможно только проведение базовой программы ЭКО со стимуляцией суперовуляции (со своими половыми клетками). Донорские программы (с использованием донорских яйцеклеток, донорских эмбрионов), программы с использованием суррогатной матери не оплачиваются из фонда ОМС. Без стимуляции в виду различных причин, программа оплачивается пациентами самостоятельно.

Процедуру ЭКО при отказе по ОМС или при желании можно пройти платно.

Стоимость базовой процедуры ЭКО в среднем составляет около 170 000-200 000 рублей.

В неё входит все четыре этапа ЭКО с препаратами для стимуляции при условии использования своих собственных половых клеток. Донорские яйцеклетки и донорская сперма оплачиваются отдельно.

Стоимость 1 яйцеклетки составляет от 20 тыс рублей. Стоимость донорской спермы от 12000 до 35000 рублей за 1 порцию.

Предимплантационная генетическая диагностика эмбрионов, позволяющая исключить генетические заболевания у эмбриона, оплачивается отдельно. А также биопсия трофэктодермы эмбрионов за биопсию всех эмбрионов.

Перенос ранее замороженных эмбрионов можно проводить как бесплатно по ОМС, так и на коммерческой основе.

Стоимость разморозки эмбриона и переноса его в матку обходится в среднем от 35 до 50 тысяч рублей».

Культивирование эмбрионов

Культивирование эмбрионов – один из важнейших этапов ЭКО.

Культивированные до 5 суток эмбрионы могут быть перенесены в полость матки или заморожены (витрифицированы)

Оптимальные условия для культивирования эмбрионов

Этап культивирования начинается с момента передачи эмбриологу яйцеклеток, полученных в процессе пункции яичников. Женские половые клетки очень требовательны к условиям внешней среды. Главной задачей эмбриолога является поддержание температурного режима в очень узком коридоре: от 34 °С до 37,5 °С во всех емкостях, где будут находиться яйцеклетки. И чем быстрее яйцеклетки будут перенесены из фолликулов в инкубатор, тем лучше.

На этапе культивирования наряду с поддержанием оптимальной температуры на развитие эмбриона влияет и газовый состав инкубатора. На сегодняшний день практически все современные инкубаторы содержат 6 % углекислого газа.

Основные культуральные среды также адаптированы к данному показателю СО₂. Эмбриологические среды, насыщаясь углекислотой, приобретают нужную кислотность, что обеспечивает оптимальные условия для развития эмбриона. Кроме углекислого газа эмбриологи следят и за содержанием кислорода. Он является сильным окислителем, под воздействием которого образуются свободные радикалы, способные нарушить развитие эмбрионов. Если в воздухе содержание кислорода 20,9 %, то в матке и фаллопиевых трубах этот показатель не выше 5 %. Чтобы избежать отрицательного влияния свободных радикалов на яйцеклетки и эмбрион, содержание кислорода в газовом составе инкубатора также не должно превышать 5 %.

Значимость системы вентиляции в эмбриологической лаборатории

Еще одним важным условием эффективной работы эмбриологической лаборатории являются условия газообмена в помещении. Обычное проветривание, простая система вентиляции – все это не способно обеспечить нужный уровень очищения воздуха. Иначе любые запахи за стеной, будь то дорогой парфюм или запах краски, моментально просачивались бы в лабораторию и отрицательно влияли на развитие эмбрионов.

Качество культивирования эмбрионов зависит от уровня оснащенности эмбриологической лаборатории

Клиника «ЭКО на Петровке» оборудована современной многоуровневой системой очищения воздуха, включая угольную фильтрацию. Обмен воздуха в эмбриологической лаборатории происходит ежеминутно. Это значит, что 60 раз в час воздух в помещении полностью обновляется.

В чем плюсы культивирования эмбрионов до стадии бластоцисты?

До 2003 года все клиники России культивировали эмбрион до 2–3 суток. Поскольку условия в эмбриологической лаборатории были неудовлетворительными, эмбрион старались переносить в полость матки как можно раньше, чтобы повысить успешность ЭКО. Сегодня ситуация изменилась. Поддержание идеального газового состава в инкубаторе, наличие оптимальных культуральных эмбриологических сред – все это позволяет создать необходимые условия для более длительного культивирования эмбрионов до стадии бластоцисты.

Бластоциста – это эмбрион на 5–6-е сутки своего развития, который состоит из внешней оболочки (трофэктодермы) и внутренней клеточной массы.

Преимущества выращивания эмбрионов до стадии бластоцисты:

1. Отсеивание нежизнеспособных эмбрионов. Бывают случаи, когда до 3 суток эмбрион нормально растет, а после 3–4-х суток его развитие прекращается. В день оплодотворения образуется одна клетка – зигота, на 2-й день в результате процессов деления эмбрион состоит уже из 4 клеток. На 3-и сутки – из 8 клеток. Если на 3, 4, 5-е сутки количество клеток остается неизменным или появляются признаки дегенерации, это говорит о нежизнеспособности эмбриона. Его перенос точно не даст беременности.

Деление клеток эмбриона происходит очень активно, и с каждым днем наряду с ростом количества клеток у эмбриона появляются новые структуры

1. Отсеивание эмбрионов с аномальным набором хромосом. В 60–80 % случаев причиной ранних выкидышей являются хромосомные аномалии эмбриона. Культивирование до стадии бластоцисты позволяет провести преимплантационную генетическую диагностику, не повредив при этом эмбрион и не снизив его шансы на успешную имплантацию. Забор материала для генетического исследования берут из оболочки бластоцисты – трофэктодермы, что обеспечивает высокую диагностическую информативность анализа (так как врач изучает не одну, а несколько клеток) при минимальной потере клеточной массы. Для сравнения: в связи с большой потерей клеточной массы проведение ПГД на третьи сутки существенно снижало шансы на получение беременности.

Специалисты клиники «ЭКО на Петровке» проводят культивирование эмбриона до 5–6 суток, что позволяет путем естественного отбора отсеять значительную часть заведомо нежизнеспособные и аномальные эмбрионы. Благодаря этому удается значительно повысить шансы на получение здоровой беременности после первого же переноса.

Запишитесь на консультацию в клинику «ЭКО на Петровке» по телефону: +7 (495) 909 9 909!

Давайте вместе преодолеем бесплодие.

Зачем нужно культивирование эмбрионов в ЭКО

После оплодотворения яйцеклетки нуждаются в подращивании в специальных средах. За ними наблюдают на протяжении нескольких дней, а затем выбирают более качественные для подсадки.

Что такое культивирование в ЭКО?

Культивирование гамет и эмбрионов – это способ поддержания развития будущего эмбриона вне организма. Через 18 часов после соединения половых клеток определяют, произошло ли оплодотворение. Если результат положительный, яйцеклетки переносят на специальную среду, которая имитирует жидкость в просвете маточных труб.

Продолжительность культивирования может быть различной:

• «базовая» длительность составляет 3-4 дня;
• продолжительное культивирование – 5-6 дней.

Выбор срока культивирования зависит от различных факторов:

• оснащенность клиники;
• наличие специальных сред для пролонгированного культивирования;
• количество полученных зигот;
• состояние организма матери.

Если от женщины было получено мало яйцеклеток, а оплодотворилось 1-2, то используют перенос на 3 день.

Женщинам до 36 лет с 1 или 2 попыткой ЭКО рекомендуют выполнять подсадку одной бластоцисты на 5 день. Считается, что зародыш к 5 суткам более жизнеспособен, а состояние эндометрия оптимально для имплантации.

Среды для культивирования эмбрионов

До пересадки эмбриона в матку его растят в специальных условиях в инкубаторе. Каждый этап ЭКО протекает в своей среде, которая подобрана с учетом физиологии женского организма. Они стараются повторить процессы, происходящие в маточных трубах по мере продвижения по ним яйцеклетки. Среды для культивирования эмбриона отличаются по своим характеристикам:

• Среды для последовательного культивирования до 3 дня. Состав доказано повышает частоту дробления, имеет оптимальный уровень рН 7.2, что способствует улучшению показателей развития зародыша. Как результат – большее количество подходит для подсадки. Состоят такие среды из заменимых аминокислот, альбумина, витаминов, лактата кальция, практически не содержат глюкозу.
• Среды для культивирования до 5 дня содержит аминокислоты, большое количество глюкозы, фосфат, таурин и витамины. Концентрация веществ учитывает физиологические потребности бластоцисты.
• Единые среды подходят для всех этапов ЭКО – от оплодотворения до культивирования и подсадки эмбриона. Вероятность имплантации увеличивает добавление гиалуроновой кислоты.

Этапы развития эмбриона

В оплодотворенной яйцеклетке ежедневно происходят изменения.

На 1 день оценивается, произошло ли оплодотворение. Яйцеклетка считается оплодотворенной, если в ней различимы 2 пронуклеуса – генетический материал родителей. На этом этапе отбраковывают неподходящий материал:

• Если имело место оплодотворение двумя или тремя сперматозоидами;
• Незрелые яйцеклетки, в которых не произошло оплодотворение.

Перенос в этот период не выполняют по двум причинам:

• Яйцеклетка должна находиться в маточной трубе, а не в матке.
• Нет критериев для определения жизнеспособной качественной яйцеклетки.

На 2 день происходит дробление яйцеклетки с образованием двух бластомеров. Специалисты оценивают формы бластомеров, количества безъядерных частей. Чем их больше, тем ниже потенциал клетки на дальнейшее развитие. Пересадку в этот день выполняют только при получении 1-2 яйцеклеток.

На 3 день образуется уже до 8 бластомеров. Если есть какие-то аномалии, то развитие эмбриона прекращается само. В этот день уже возможно выполнение подсадки, но критерии оценки ненадежны в определении жизнеспособности.

На 4 день 16 бластомеров образуют морулу, в которой постепенно образуется полость. В физиологических условиях она попадает в матку. Пересадка в этот день дает хорошие результаты по приживаемости эмбриона.

На 5-6 день полость внутри морулы увеличивается до половины ее объема, она переходит в стадию бластоцисты. Клетки внутри нее располагаются слоями, которые дадут начало телу зародыша и оболочкам с плацентой. Бластоциста освобождается от блестящей оболочки, которая покрывала ее снаружи. С этого момента она способна прикрепляться к стенке матки.

Перенос эмбриона на 5-6 день увеличивает количество прижившихся зародышей и успешных беременностей. По статистике приживается каждый второй зародыш. Это дает возможность подсаживать меньшее число бластоцист, что снижает вероятность многоплодных беременностей.

Протоколы культивирования в ЭКО

Данные о развитии клеток по дням заносятся в виде специальных буквенно-цифровых обозначений в протокол культивирования эмбрионов. Расшифровка отражает состояние клеток, бластоцист. Оцениваются такие показатели:

• количество бластомеров по дням, день оплодотворения считают нулевым;
• процент фрагментации обозначают буквами;
• размер бластоцисты определяют по объему полости, присваивают номер от 1 до 6;
• две буквы обозначают качество клеточной массы бластоцисты, первая – внутреннего слоя, вторая – трофобласта;

Качество клеток определяется классом, где 1(А) – отлично, а последний 4(D) – неудовлетворительно. Эмбрионы 4 класса не используются для подсадки и криоконсервирования.

Когда культивирование невозможно?

Для культивирования эмбрионов противопоказаний нет, но при наличии следующих факторов не рекомендуется прибегать к ЭКО без предварительного лечения:

• миома;
• злокачественные опухоли;
• воспалительные или инфекционные процессы;
• обострение хронических заболеваний;
• отсутствие матки.

Метод подращивания эмбрионов повышает процент наступления беременностей. При выборе срока культивирования врач должен отталкиваться от состояния конкретной пациентки.

Юлия Шевченко, акушер-гинеколог, специально для Mirmam.pro

Полезное видео

ОПЛОДОТВОРЕНИЕ ООЦИТОВ И КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНОВ

После получения эякулята проводится спермограмма для окончательного выбора метода оплодотворения ооцитов – обычное ЭКО (когда очищенная фракция активноподвижных сперматозоидов добавляется в среду, в которой культивируются ооциты, оплодотворение происходит самостоятельно) либо ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида в ооцит, требуется при недостаточной концентрации, подвижности или морфологии сперматозоидов, при наличии высоких концентраций антиспермальных антител в сперме, при отсутствии оплодотворения в предыдущей попытке ЭКО, при проведении преимплантационной генетической диагностики на моногенные заболевания, а также в ряде других случаев).

Качество спермы у мужчин очень вариабельно и подвержено влиянию многих факторов, поэтому нередко спермограмма на момент пункции значительно отличается от полученной в ходе предварительного обследования, что иногда влечет за собой изменение запланированного на этапе подготовки к ЭКО метода оплодотворения. В таком случае пациентов обязательно ставит в известность лечащий врач или эмбриолог.

Оплодотворение выбранным методом обычно проводится через 3-6 часов после пункции, это время нужно для окончательного дозревания ооцитов, а также для их адаптации к условиям вне организма. После оплодотворения ооциты помещаются в индивидуальные капли среды под слоем минерального масла в чашке Петри в инкубатор, поддерживающий постоянные условия температуры, влажности и кислотности среды.

Через 16-18 часов после оплодотворения (1й день развития) оценивается наличие в цитоплазме ооцитов 2-х пронуклеусов (мужского и женского), что свидетельствует о нормально прошедшем оплодотворении. Уже на этой стадии по ряду признаков можно отличить перспективные в дальнейшем зиготы (оплодотворенные ооциты) от неперспективных. При наличии в цитоплазме 3-х и более пронуклеусов, зиготы считаются оплодотворенными неправильно и такие эмбрионы отбраковываются. Это может быть вызвано проникновением более одного сперматозоида при оплодотворении или неотделением второго полярного тельца у ооцита. При отсутствии пронуклеусов в цитоплазме или наличии всего одного пронуклеуса, за зиготами проводится дальнейшее наблюдение, в данном случае возможно запаздывание процесса оплодотворения. Такие эмбрионы остаются в резерве и переносятся в полость матки только при отсутствии эмбрионов, развившихся из нормально оплодотворенных зигот. Каждая зигота фотографируется, и результат описывается в эмбриологическом протоколе.

На вторые сутки развития оценивается количество клеток в эмбрионе, степень фрагментации (объем, который занимают внеклеточные кусочки цитоплазмы), равномерность дробления эмбрионов и др. Обычно в этот период эмбрион состоит из 2-6 клеток (бластомеров). Эмбрион вновь фотографируется и помещается в свежую культуральную среду, соответствующую его стадии развития. На второй день уже возможно проводить перенос эмбрионов в полость матки и/или криоконсервацию (замораживание).

На третьи сутки развития эмбрион обычно 4-10-клеточный, однако часто имеется большая вариабельность внутри группы эмбрионов одной супружеской пары. Какие-то развиваются медленнее, какие-то – быстрее, некоторые и вовсе останавливаются в развитии. Это нормально и отражает действие естественного отбора наиболее жизнеспособных. Чаще всего перенос эмбрионов проводят на третьи сутки развития, но в ряде случаев культивирование продолжают и дальше. Показанием для этого может быть, например, наличие большого количества эмбрионов хорошего качества, выбор из которых затруднен, а также ряд других причин.

На четвертые сутки развития хорошо прогрессирующие эмбрионы дорастают до стадии морулы – границы между клетками сглаживаются, эмбрион приобретает форму шара с небольшими выпуклостями (от лат. morulae – тутовая ягода). Еще раз сменяется среда культивирования, проводится оценка качества эмбрионов. Перенос на четвертый день практикуется редко.

На пятые сутки развития в идеале эмбрион дорастает до стадии бластоцисты – многоклеточного эмбриона с полостью и двумя популяциями клеток – внутренней клеточной массой (она даст начало всем тканям будущего эмбриона) и трофобласта (из него сформируются все внезародышевые оболочки – плацента, хорион). До этой стадии дорастают обычно не все эмбрионы, а только самые сильные и имеющие наибольший шанс имплантироваться и развиваться дальше. Перенос на пятые сутки развития проводится примерно у 20% пациентов. Также в этот день проводится криоконсервация оставшихся после переноса эмбрионов хорошего качества.

Культивирование эмбрионов: подготовка и техника проведенияСсылка на основную публикациюwpDiscuzAdblock
detector