Гемоглобинометр: методика определения гемоглобина
Гемоглобинометр
Гемоглобинометр – это устройство, с помощью которого определяется содержание гемоглобина в крови человека. Железосодержащий белок, будучи одним из самых важных элементов крови, является основными компонентом эритроцитов. Гемоглобин «захватывает» кислород и транспортирует его ко всем внутренним органам и тканям. Без жизненно важного белка ткани и клетки организма не могли бы нормально насыщаться кислородом и исправно функционировать.
Гемоглобинометр позволяет определить концентрацию гемоглобина в крови и сравнить его с нормальными показаниями. Дефицит или избыток этого показателя крови может быть крайне опасным для здоровья человека и свидетельствовать о серьезных заболеваниях в организме.
Норма гемоглобина у женщин и мужчин
У женщин нормальные показатели гемоглобина колеблются от 120 до 140 грамм на один литр крови (сокращенно г/л.). У девочек, которым еще не исполнилось восемнадцать лет, количество гемоглобина может колебаться в пределах 110-153 г/л. Если представительница прекрасного пола – заядлый курильщик или профессионально занимается каким-либо видом спорта, норма этого элемента в крови может быть от 150 до 160 г/л.
Во время беременности уровень гемоглобина чаще всего понижается и может составлять от 105 до 120 г/л. С возрастом концентрация гемоглобина составляет примерно 118-160 г/л. Отклонение от нормы может свидетельствовать о серьезных заболеваниях, патологических изменениях и аномалиях. Если гемоглобинометр показал значение, которое не находится в пределах нормы, следует, не откладывая в долгий ящик, обратиться к доктору.
Нормальным уровнем гемоглобина для мужчин в возрасте 18-65 лет является 130-173 г/л. Для мужчин старше 65-70 лет возрастной нормой считается показатель в пределах 126-174 г/л. При выявлении отклонения от общепринятого норматива следует проконсультироваться с врачом и при необходимости пройти дополнительный ряд исследований.
Причины высокого и низкого уровня гемоглобина
Повышенный показатель гемоглобина у женщин негативно влияет на консистенцию крови (она становится более густой), вследствие чего замедляется движение и клетки не получают кислород. Если вовремя не отреагировать на повышение гемоглобина, то образовываются тромбы в сосудах. Повышение показателя может быть обусловлено различными заболеваниями, такими как: кишечная непроходимость; заболевания сердечно-сосудистой системы; заболевания крови (лейкемии).
Высокий показатель также может говорить о различных физиологических изменениях и нарушениях, таких как: чрезмерная физическая нагрузка, проживание в условиях высокогорья; гемоконцентрация (сгущение крови), обусловленная обезвоживанием организма – дегидратацией, или обширными ожогами. В таких случаях уровень гемоглобина после исключения этих причин со временем приходит в норму. Симптоматика, свидетельствующая о повышении гемоглобина, включает: ухудшение работы мозга; снижение работоспособности; отсутствие концентрации; усталость; сонливость или бессонницу; отсутствие аппетита; чрезмерную раздражительность. При появлении этих симптомов необходимо обратиться к врачу.
У мужчин повышение уровня гемоглобина также может быть связано с курением, интенсивными тренировками, физическими нагрузками и сильными стрессовыми потрясениями. Признаками высокого гемоглобина у мужчин являются:
- повышенная утомляемость;
- частые головные боли;
- головокружение, обмороки;
- сонливость;
- потеря аппетита.
Данная симптоматика характерна для ряда заболеваний: дыхательной и сердечной недостаточности; поликистоза почек; эритремии. Количество гемоглобина в крови может колебаться из-за серьезного обезвоживания организма.
Причинами низкого гемоглобина могут быть: анемии различного генеза, в том числе обусловленные различными заболеваниями; нарушение циркуляции крови; заболевания щитовидки; строгое диетическое питание; эмоциональная усталость; алкоголизм.
Определение количества белка с помощью гемоглобинометра
Устройства, измеряющие количество гемоглобина в крови, называются портативные. Они имеют функцию автоматической калибровки. Забор образца крови проводится классическим лабораторным способом: с помощью шприца с иглой набирается около 20 мкл венозной или капиллярной крови. Чтобы приготовить фотометрическую пробу применяется гемоглобинцианидная методика.
Современная методика рекомендована ВОЗ и используется в медицине на протяжении сорока лет. Разводить вещество надо в пропорции 1 к 251 (делает это лаборант). Чтобы приготовить пробу, понадобится пять миллилитров реагента. Длительность приготовления пробы варьируется от 15 до 20 минут и прямо зависит от выбранного реагента, который используется для анализа. Нужный объем пробы для проведения фотометрирования равен 2-4 мл.
Чтобы определить количество гемоглобина в крови, нужно поставить в ячейку гемоглобинометра кювету с пробой. Через несколько секунд на дисплее появится показатель концентрации железосодержащего белка. Устройство автоматически определяет количество гемоглобина. Его не запрещено трясти, греть и даже включать перед измерением показателя (он включается и выключается автоматически).
После опускания кюветы в ячейку аппарат автоматически запускается, измеряет концентрацию гемоглобина и показывает результат на мониторе. Когда кювета будет извлечена из гемоглобинометра, прибор выключится. Повторный замер возможен уже через 2-3 секунды после выключения аппарата.
Преимущества гемоглобинометра
Гемоглобинометр имеет ряд преимуществ, среди которых: наличие функции автоматической настройки калибровки (первоначальные параметры автокалибровки задают производители, они сохраняются на протяжении всей работы приспособления); длительность использования (устройство может работать без замены комплектующих в течение 5-6 лет); удобство в эксплуатации (небольшой, имеет красивый дизайн); легко чистится; есть возможность использовать стеклянные или одноразовые кюветы.
Гемоглобинометр является средством для измерения концентрации гемоглобина, его работу проверяют производители. При соблюдении указаний в инструкции и своевременном уходе за приспособлением, прибор будет работать безотказно минимум 5 лет. Аппарат просто незаменим в салонах транспортных средств скорой помощи, а также экспресс-лабораториях, стационарных исследовательских центрах и обычных медицинских учреждениях. Он используется во время выезда на дом к больным людям. Его с собой берет медицинский работник с целью измерения уровня гемоглобина в крови пациента. Если показатель не будет в пределах нормы, человеку следует обратиться к семейному доктору или терапевту.
Профилактические и терапевтические меры
Чтобы обезопасить себя от патологических колебаний гемоглобина, как в сторону увеличения, так и уменьшения, следует задуматься о профилактических и терапевтических мерах. При небольшом дефиците гемоглобина нужно соблюдать специальное диетическое питание. В ежедневный рацион должны входить продукты, содержащие железо (говядина, куриные и перепелиные яйца, орехи, бобовые, печень). Чтобы железо правильно и безопасно усваивалось, необходимо следить за состоянием желудочно-кишечного тракта.
Профилактика и лечение заболеваний, из-за которых наблюдаются скачки гемоглобина, не может проходить без адекватных физических нагрузок и прогулок на свежем воздухе. Лечащий доктор назначит лекарственные средства или биологически активные добавки, в состав которых входит железо, если выявится его дефицит. При нарушениях работы желудочно-кишечного тракта, врач назначает железосодержащие вещества для внутривенного введения.
Концентрация гемоглобина в крови является одним из наиболее значимых показателей здоровья человека, поэтому за ней нужно постоянно следить. Контролировать уровень показателя крайне важно женщинам, планирующим беременность и, тем более, вынашивающим ребенка. Врачи рекомендуют периодически измерять концентрацию гемоглобина в крови с помощью гемоглобинометра пожилым людям.
Определение гемоглобина
2.3.1 Унифицированный метод определения количества гемоглобина на гемоглобинометре фотометрическом портативном МиниГЕМ
Принцип метода: Основан на превращении гемоглобина в цианметгемоглобин при добавлении к крови реактива (р-р Драбкина). Под влиянием железисто – синеродистого калия гемоглобин окисляется до метгемоглобина (гемоглобина), который затем превращается при помощи калия в цианметгемоглобин (гемоглобинцианид).
Реактивы: 1) Трансформирующий р-р
Устройство: Гемоглобинометр МиниГЕМ 540 представляет собой специализированный фотометр, предназначенный для определения общего гемоглобина крови гемиглобинцианидным методом с фотометрированием на длине волны 540 нм.
Диапазон измеряемой прибором оптической плотности составляет от 0 до 0,9. Б, что соответствует концентрации общего гемоглобина крови от 0 до 360 г/л. В приборе используется стандартная проб подготовка – 20 мкл крови, разведение 1:250. Суммарная погрешность определения гемоглобина (с учетом погрешностей дозаторов и погрешностей биохимического метода), полученная при сравнительных медицинских испытаниях, не превышает 2% (коэффициент вариации) во всем диапазоне измеряемых концентраций. При этом собственная погрешность гемоглобинометра как фотометра – не более 1%, а воспроизводимость, оцененная по коэффициенту вариации, – не более 0,25%.
Два фактора обеспечивают это качество прибора:
высокая воспризводимость характеристик раствора гемиглобинцианида, который сохраняет свои свойства при надлежащем хранении долгие годы, в т. ч. коэффициента пересчета оптической плотности в концентрацию гемоглобина (или фактора калибровки);
конструкция гемоглобинометра МиниГЕМ 540 обеспечивает высокую надежность фотометрических параметров прибора. МиниГЕМ 540 снабжен функцией саморегулирования, он обладает многолетней стабильностью измерений.
Другая отличительная особенность гемоглобинометра – полностью автоматизированная процедура фотометрирования.
Для определения гемоглобина достаточно опустить кювету с фотометрической пробой в прибор, и через мгновенье на дисплее отобразится значение концентрации. Пересчет оптической плотности раствора в концентрацию производится автоматически. Перед измерением прибор не нужно включать, “прогревать”, подстраивать или калибровать. Гемоглобинометр автоматически выключится при вынимании кюветы до следующего измерения.
Третья особенность гемоглобинометра МиниГЕМ 540 – его портативность и низкое энергопотребление.
Масса прибора без батарей не превышает 300 г. Питание от сети через адаптер или от встроенных батарей. Ресурс батарей – 1 000 000 измерений, или 4 года работы.
Для контроля работоспособности гемоглобинометра используется контрольная стеклянная мера, паспортизованная для каждого прибора. Внутрилабораторный и внешний контроль качества может проводиться с помощью обычных контрольных материалов -контрольных растворов гемоглобина.
подготовить пробирки, поместив в каждую из них по 5 мл трансформирующего раствора (раствор Драбкина);
во время взятия крови в каждую пробирку перенести по 20 мкл капиллярной крови( 0,02 мл пипеткой Сали) и тщательно перемешать раствор;
через 20 мин каждую пробирку перед измерением перемешать путем переворачивания пробирки вверх вниз (время лизирования) и провести серию измерений:
Учет результата:
перелить в оптическую кювету реакционную смесь из очередной пробирки;
опустить оптическую кювету в фотометрическую ячейку прибора, при этом автоматически произойдет фотометрирование реакционной смеси, сопровождаемое звуковым сигналом, и на индикаторе появится число, соответствующее концентрации гемоглобина;
записать результат измерения.
2.3.2 Унифицированный метод определения концентрации гемоглобина на мини -фотометре MF-1020
Введение: мини фотометры являются миниатюрными настольными приборами для измерения гемоглобина крови.
Особенности прибора: цифровой индикатор, кювета открытого типа, относительная устойчивость к светорассеиванию, двухканальная оптическая схема.
Прибор показывает концентрацию гемоглобина в г/л. Светопоглощение зеленого света с длиной волны(546 нм) раствором гемиглобинцианида напрямую переводятся в единицы измерения гемоглобина. Настройка и калибровка прибора осуществляется при помощи двух ручек – « ZERO» и «CAL» . К прибору прилагается светофильтр (калибратор), назначение которого – убедиться в исправности оптических и электронных узлов и калибровки минифотометра.
Масса прибора 1 кг 300 гр.
2.В течение 10 мин прогрейте.
3.Убедитесь в том, что прибор правильно откалиброван.
4.Установите кювету с холостой пробой реагента трансформирующего раствора. 5.С помощью ручки « ZERO» на цифровом индикаторе установите нулевое значение. 6.Приготовьте кровь, разбавив ее 1:251 с трансформирующим раствором и проведите измерение.
1 .Двадцать микрометров крови (0,02 мл) необходимо разбавить в 5 ,0 мл трансформирующего раствора р-ра Драбкина- 1:21
2.Хорошо перемешайте (встряхните). Прежде чем приступить к измерению, подождите 5-10 мин, особенно если реагент не содержит детергент.
Калибровка минифотометра по стандартному р-ру гемиглобинцианида
Вставьте кювету, содержащую трансформирующий реактив (р-р Драбкина) в кюветный отсек.
При помощи ручки « ZERO» установите нулевое значение в цифровом табло.
Вставьте кювету, содержащую стандартный р-р гемиглобинцианида, в кюветный отсек.
При помощи ручки « CAL» установите данное значение стандартного калибровочного р-ра в цифровом табло (пример 150 г/л).
Повторите процедуру калибровки от пункта 1 до пункта 4.
Калибровка окончена, и Вы можете приступить к измерению
Калибровка минифотометра при помощи калибратора (по фактору)
1.Вставьте калибратор со светофильтром в кюветный отсек таким образом, чтобы была
видна надпись «ZERO» с цифровым значением (например, 0.1.6)
2.При помощи ручки «ZERO» установите это значение (п.п.0.1.6) в цифровом табло.
3.Переверните калибратор и вставьте его в кюветный отсек таким образом, чтобы
была видна надпись «CAL» с калибровочным значением (пример 159).
4.При помощи ручки «CAL» установите данное значение на цифровом табло.
Повторите процедуру от пункта 1 до пункта 4.
Калибровка окончена, и Вы можете приступать к измерениям.
Требования к реактивам:
1.Любая модификация р-ра пригодна для применения.
2.Разбавление 10 мкл крови в 2,5 мл трансформирующего не пригодно для этой модели.
3.Можно приготавливать самим р-р-1 раз в месяц, хранится в посуде из темного стекла.
2.3.3 Унифицированный метод определения гемоглобина на фотоэлектроколориметре
Принцип метода: Гемоглобин, взаимодействуя с ацетонциангидрином, в присутствии железосинеродистого калия K3[Fe(CN)6] образует гемиглобинцианид красного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина в пробе крови.
Реактивы: 1) трансформирующий раствор (0,5 мл ацетонциангидрина, 0,2 г железосинеродистого калия, 1 г гидрокарбоната натрия NaHCb растворяют в 1 л дистиллированной воды; реактив стоек, хранится в посуде из темного стекла); 2) стандартный раствор гемиглобинцианида (раствор, выпускаемый фирмой «Ренал», содержит 59,75 мг% гемиглобинцианида; раствор фирмы «Иммуна» —64,23 мг%. Это соответствует концентрации гемоглобина в крови 150 и 154 г/л при разведении ее в 251 раз).
Ход определения. К 5мл трансформирующего раствора добавляют 0,02 мл (капилляр Сали) крови. При этом кровь разводится в 251 раз. Оставляют пробирки на 20 мин при комнатной температуре.
Фотометрируют при зеленом светофильтре (длина волны 540 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм (1 см) против дистиллированной воды.
Стандартный раствор фотометрируют при тех же условиях, что и опытную пробу.
Расчет. Содержание гемоглобина определяют по калибровочному графику, который строится по стандартному раствору гемиглобинцианида или по формуле:
Где С- концентрация гемоглобина в опытной пробе, г/л
Ео – оптическая плотность опытной, ед. опт. Плотность
Ек- оптическая плотность калибровочной пробы, ед.плот.
120-концекнтрация гемоглобина кВ калибровочном растворе, г/л.
Приготовленные разведения фотометрируют. против дистиллированной воды («холостая» проба).
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Лучшие изречения: Студент – человек, постоянно откладывающий неизбежность. 11148 – 
| 7512 – 
или читать все.
Гемоглобинометр: методика определения гемоглобина
Количество гемоглобина можно определить или спектроскопически, посредством определения количества железа, или путем измерения красящей способности крови (колориметрически).
Для клинических целей используется последний метод, который требует небольшого количества крови и дает возможность быстро определить количество гемоглобина. Наиболее распространенным является метод Говерса в видоизменении Сали.
Определение гемоглобина по Сали основано на том, что гемоглобин крови в растворе соляной кислоты переходит в солянокислый гематин, который и сравнивается с гематином определенной концентрации, взятом в качестве стандарта. Процент гемоглобина в этом случае определяется колориметрически.
Набор Сали состоит из запаянной стандартной пробирки, наполненной раствором солянокислого гематина. Ввиду того, что стандартная жидкость довольно быстро выцветает, в последнее время выпущены стандарты из цветного стекла, окрашенные под цвет солянокислого гематина металлическими окислами. Эти стандарты не выцветают даже под действием прямого солнечного света.
Между стандартными пробирками помещается пробирка, имеющая деления от 10 до 140 или от 10 до 170 такого же диаметра, как и первая. Пробирка с делением от 10 до 140 предназначена для определения гемоглобина в единицах Сали, а от 10 до 170—в процентах.
Подставка, в которой помещаются стандартные и градуированные пробирки, представляет собою деревянную колодку с вырезанными продольными отверстиями и углублениями для них. Сзади колодки прикреплено матовое стекло, которое дает рассеянный свет; на его фоне резко оттеняется окраска стандарта и испытуемой сыворотки.
Для взятия крови прилагается капиллярная пипетка с меткой 20 мм, которая определяет количество крови, взятой для исследования.
Кроме гемоглобинометра, для определения гемоглобина необходимо иметь N/10 раствор НС1 и дистиллированную воду.
Техника определения следующая. В градуированную пробирку до метки 20 набирается N/10 раствор НС1, затем в капилляр до метки 20 мм3 насасывается кровь и, осторожно очистив конец капилляра, переносят ее в пробирку
С соляной кислотой. Кровь осторожно выдувают в А710 раствор соляной кислоты, содержимое пробирки из верхнего прозрачного слоя набирается в капилляр и снова выдувается в пробирку.
Капилляр промывается 2 или 3 раза и осторожно удаляется из пробирки. Кровь гемолизируется, и при распаде образуется солянокислый гематин. Жидкость постепенно становится коричневой. Спустя 5—7 минут после выдувания крови, в пробирку начинают прибавлять дистиллированную воду. Вначале прибавляют по нескольку капель, а затем, по мере изменения цвета и приближения его к стандарту,—то одной капле. Кровь смешивается или стеклянной палочкой с утолщением на конце или же покачиванием прсбирочки. Необходимо следить за тем, чтобы жидкость при смешивании не терялась.
Уровень жидкости после разведения указывает на количество гемоглобина. Учет ведется по нижнему мениску жидкости. Допустимой ошибкой при вторичном исследовании той же самой крови считается расхождение в пределах пяти делений. Метка 80 на пробирке с делением до 140 и цифра 100 на пробирке с делением до 170 соответствует 16,0—17,0 гемоглобина в 100 мл крови. Чтобы получить абсолютную цифру, показывающую количество гемоглобина в граммах в 100 мл крови, необходимо показания гемометра в процентах Сали умножить на 0,17, а количество в единицах— на коэффициент 0,2125.
Количество гемоглобина у здоровых животных колеблется в следующие пределах (см. табл. на стр. 418).
Колебания гемоглобина зависят от возраста, пола, породы, характера кормления и некоторых других условий. При патологических процессах количество гемоглобина может быть увеличено и уменьшено по сравнению с нормальными показателями.
Увеличение количества гемоглобина носит название плейохромии. Она может возникнуть вследствие сгущения крови при потере жидкости организмом (понос, рвота, потливость), при образовании экссудатов и транссудатов, Плейохромию отмечают при кровепятнистой болезни лошадей, интоксикациях и отравлениях. Повышение количества гемоглобина отмечается при физическом напряжении лошади. При хорошей подготовке (тренировка) количество гемоглобина остается почти без изменений.
Уменьшение гемоглобина (олигохромемия) встречается довольно часто и особенно при заболеваниях, связанных с анемией. Олигохромемия является симптомом острых и хронических заболеваний, различных по своему происхождению.
Олигохромемия связана с уменьшением общего количества эритроцитов или обеднением эритроцитов гемоглобином. Следовательно, олигохромемия определяет не только степень, но и характер анемии. Необходимо, однако, учесть, что правильная оценка может быть сделана только при условии подсчета эритроцитов и определения величины цветного показателя.
Определение цветного показателя. Цветной показатель дает представление об отношении гемоглобина к красным кровяным тельцам. Метод определения цветного показателя основан на сравнении. Если в норме цветной показатель равен примерно единице, то изменение этой цифры в сторону увеличения или уменьшения рассматривается, как весьма важный показатель нарушения соотношения между эритроцитами и гемоглобином.
У животных определение цветного показателя проводится по формуле:
Гемоглобин 2 Эритроциты 2 Гемоглобин 2 х эритроциты 1
Гемоглобин 1 / эритроциты 1 = гемоглобин 1 x эритроциты 2
Где гемоглобин 1 и эритроциты 1 показывают среднее количество гемоглобина и эритроцитов у здорового животного и гемоглобин 2 и эритроциты 2—найденное количество гемоглобина и эритроцитов у исследуемых животных. Если у лошади взять за норму количество гемоглобина 75, а эритроцитов 7 500 000, то цветной показатель будет равен единице. Всякое отклонение в количестве гемоглобина и эритроцитов поведет к изменению цветного показателя. Необходимо учитывать только такие отклонения от нормы, которые превышают 15%. Небольшие отклонения учитывать не следует.
Определение цветного показателя имеет значение в дифференциации анемий. При постгеморрагических анемиях, когда имеется одновременно уменьшение как количества эритроцитов, так и гемоглобина, цветной показатель приближается к единице; ниже единицы цветной показатель бывает при вторичных анемиях, при которых снижается количество гемоглобина, при почти нормальном или слегка сниженном количестве эритроцитов; выше единицы цветной показатель отмечается при гемолитических анемиях, когда в ток крови выбрасывается значительное количество молодых клеток (повышенная регенерация).
Для суждения о средней насыщенности эритроцитов гемоглобином практически можно использовать определение кровяного числа. Оно получается делением найденного количества гемоглобина на число эритроцитов в миллионах, например:
75% / 7(000000) = 11 или 90% / 10(000000) =9
Величина кровяного числа неодинакова у различных животных и зависит от количества эритроцитов и гемоглобина в норме, но в среднем она приближается к 10.
Методы определения гемоглобина в крови: какой подсчет практичнее?
Гемоглобин (Hb) – молекула, с помощью которой переносится кислород. Она расположена внутри зрелых эритроцитов, лишенных ядер. Клетки получают кислород из альвеол легких, переносят его органам к клеткам-мишеням. От них получают углекислый газ, и переносят его обратно в легочную систему. Без этого действия невозможна жизнь человека. Существуют различные состояния, при которых гемоглобин может повышаться или снижаться. Для диагностики используют различные лабораторные методы определения функции соединения гемоглобина. Их подбирает врач индивидуально для каждого пациента.
Клиническое значение определения гемоглобина
У взрослого человека норма концентрации Hb зависит от пола:
- женщины 11-14г/% или 110-140 г/л;
- мужчины 12-16 г/% или 120-160 г/л.
Для мужчин норма более завышена, так как они имеют большую мышечную массу, по сравнению с женщинами.
Снижение концентрации гемоглобина наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях:
- сниженная концентрация эритроцитов в следствии железодефицитной, серповидно-клеточной анемии;
- недостаточное количество веществ, которые влияют на продукцию эритроцитов (фолиевая кислота, витамин B12);
- заболевание красного костного мозга.
Повышенная концентрация Hb наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях:
- повышенная продукция эритроцитов при заболевании красного костного мозга, злокачественных новообразованиях;
- компенсаторное повышение количества эритроцитов вследствие сердечно-сосудистых и легочных заболеваний;
- снижение количества плазмы крови вследствие чего число форменных элементов повышается в 1 л биологической жидкости.
Гемоглобин появляется в эритроцитах после утраты ядра и приобретении зрелости клетки. Местом утилизации красных кровяных клеток и Hb является селезенка. Жизненный цикл 1 клетки совместно составляет 120 дней. После гибели в кровь выделяется железо, которое поставляется в красный костный мозг. С помощью этого элемента продуцируются новые красные кровяные тельца.
Методы измерения гемоглобина в крови
Существуют следующие методы анализа гемоглобина в биологической жидкости:
После использования соответствующей методики чаще всего применяют полуавтоматический анализатор, который измеряет спектр длины волны молекулы Hb.
Подсчет показателей осуществляется не только в крови, но и в моче, так как в мочевыделительной системе возможны небольшие или значительные кровотечения.
Полуавтоматический гематологический анализатор полностью исключают реставрации врачебные ошибки в отчете необходимого значения. Но прибор не сможет увидеть и распознать нарушение различных параметров.
Ручной подсчет основывается на применении реактива и биологической жидкости. Метод не подсчитывает число клеток, а определяется их присутствие или отсутствие. Подходит для мочи
Унифицированные методы определения гемоглобина
Унифицированная методика – способы измерения показателей, применяемые в большинстве лаборатории. Являются точными, быстрыми, практичными. Для Hb это гемицианидный метод с фотоколориметрическим подсчетом. Позволяет выявить точное количество показателя с помощью подсчета длины волны на специализированном полуавтоматическом приборе.
Второй унифицированной методикой является гимехромный способ. Его принцип тот же, но используются более качественные реактивы, которые не приносят вреда здоровью врачей.
Гемиглобинцианидный метод определения гемоглобина в крови
У гемоглобина имеется множество форм, поэтому рассчитать длину его волны очень сложно. Для упрощения подсчета применяют специализированные химические вещества, которые переводит его в метгемоглобин.
Для получения точных результатов необходимо использовать трансформирующий раствор, специализированные измерительные пробирки, фотоэлектроколориметр. Hb имеет длину волны 540 м. Именно в таком пределе прибор подсчитывает заданный показатель.
Полученные данные подставляют в формулу, которая переводит общее количество показатели в граммы на литры (г/л).
Важно! На данный момент метод определения концентрации гемоглобина в крови используется редко, так как применяемые реактивы опасны для жизни и здоровья в врачей-лаборантов. При нарушении правил приготовления могут возникнуть ожоги кожных покровов и слизистых оболочек.
Читай подробно о гемиглобинцианидном методе в отдельной статье!
Гемихромный метод определения гемоглобина в крови
С помощью методики Hb переводится в циангемоглобин с помощью реактивов, которые полностью безопасны для человека. Для этого используют цианистые соединения (натрий додецилсульфат, лаурилсульфат).
Образуется гемихром, который подсчитывается при длине волны 540 нм. Полученные данные подставляют в формулу для перевода показателя в г/л.
Цианидный метод исследования гемоглобина в крови
Для проведения анализа используют капиллярную и венозную кровь. В биологическую жидкость человека добавляют трансформирующий раствор. С помощью него происходит преобразование всех форм Hb в метгемоглобин.
В пробирку наливают 5 мл реагента и 20 мкл биологической жидкости. Выжидают 10 минут, пока произойдет реакция. Полученную жидкость заливают в специальную кювету, фотоэлектроколориметр пропускает через нее лучи, подсчитывает элементы в области длины волны, равной 543 нм. Содержание Hb рассчитывается по формуле с помощью полученных показателей.
Метод Сали для определения гемоглобина в крови
Определение количества гемоглобина по методу Сали редко применяется в клинических учреждениях, так как существуют более совершенные способы.
Получают биологическую жидкость человека, в которую добавляют хлористоводородная кислоту. Раствор тщательно перемешивают. Это позволяет Hb перейти в другую форму – солянокислый гематин. Добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока окрашивание не будет идентичным с контрольной пробиркой (коричневый цвет).
На нижнем мениске пробирки будет стоять цифра, которая указывает на содержание показателя в 100 г крови. Для вычисления концентрации в 1 литре, показатели умножают на 10. Процентное содержание Hb вычисляется с помощью пропорции:
- А%=Х
- Х=А×100/16,7
- Х – определяемый показатель,
- А – полученное число гемоглобина с помощью гемометра,
- 16,7 – процентное количество гемоглобина в контрольной пробе.
Метод спектрального анализа для измерения гемоглобина
Наиболее точным методом определения гемоглобина является использование спектрофотометра. Он определяет только 1 из форм гемоглобина, улавливая длину его волны. В крови человека существуют различные формы Hb:
- Оксигемоглобин;
- Дезоксигемоглобин;
- Карбоксигемоглобин;
- Метгемоглобин.
Для исследования с помощью спектрофотометра необходим перевод показателей только в 1 из форм. Для этого применяют различные реактивы. Показатель окрашивается определенным цветом (красный, зеленый). Его длину волны улавливает прибор, подсчитывает все элементы в заданной траектории.
Аммиачный метод определения гемоглобина
Аммиачный метод количественного определения гемоглобина соответствует предыдущим способам. Разницу составляет использование аммиака в концентрации 0,04%. Проба должна настояться, чтобы произошла реакция перехода всех форм Hb в одну. Ее рассчитывают с помощью полуавтоматического анализатора в виде спектрофотометра. Раствор помещают в кювету, устанавливают в прибор. Рассчитывают показатель на длине волны 543 нанометров.
Методы определения гемоглобина в моче
Существует 4 разновидности исследования мочи. Каждая из них отличается применяемыми реактивами. Для исследования собирают только свежую порцию урины. Если она настоится, Hb превратиться в медгемоглобин, Поэтому реакция будет невозможна. Урину подготавливают. Для этого к ней добавляет 2 мл уксусной кислоты и 5 мл диэтилового эфира.
- Реакция с гваяковой кислотой. Разводят щепотку кислоты, добавляют 3 мл этанола 96%. Добавляют 8-10 капель получившейся жидкости к 8-10 каплям разведенной урины. Если Hb присутствует в образце, он окрашивается в синий цвет.
- Реакция с амидопирином. К 2-3 мл разведенной урины добавляют 10 капель раствора амидопирина и 10 капель 3% перекиси водорода. Если Hb присутствует, урина окрашивается в фиолетовый цвет.
- Реакция с бензидином. В пробирку добавляют 6 капель бензидина, 6 капель 3% перекиси водорода,4 капли чистой урины. Если Hb присутствует, получившаяся жидкость окрашивается в зеленый цвет.
- Использование тест-полосок, таблеток. Они содержат специализированные реактивы в готовом виде. Полоски опускают в мочу, достают, оценивают цветовую шкалу. Таблетки полностью растворяют в биологической жидкости человека. Индикаторная шкала подписана на упаковке.
Какой метод определения гемоглобина наиболее точный?
Наиболее точным методом определения показателя считается фотоколориметрический с использованием гемихромного разведения. С помощью него снижается риск врачебной ошибки. Прибор автоматически подсчитывает показатель. Здесь важно правильно подготовить приборы, пробирки, кюветы, настроить аппарат. Методика безопасна для лаборанта.
В определении Hb в моче наиболее информативным является использование тест-полосок. Здесь полностью исключается риск неправильного разведения реактивов.
Определение гемоглобина является важным информативным тестом. Можно определить кровотечение в мочевыводящих путях, состояние сердечно-сосудистой и легочной системы. С помощью методов вовремя выявляются различные виды анемии при низких концентрациях гемоглобина. После получения данных рекомендуется обратиться к лечащему врачу. Он расшифрует полученный результат, выявит нормы и отклонения, назначит лечение.
Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro
Определение гемоглобина в крови
Анализ гемоглобина как дыхательного белка крови и главного компонента эритроцитов, особенности его возникновения и биологические функции. Основные виды и реагентные методы определения содержания и концентрации свободного гемоглобина в крови человека.
| Рубрика | Биология и естествознание |
| Вид | доклад |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 22.06.2015 |
| Размер файла | 227,3 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Определение гемоглобина в крови
Гемоглобин – основной дыхательный белок крови и главный компонент эритроцитов. Гемоглобин играет ключевую роль в системе дыхания организма человека: он осуществляет перенос кислорода из легких в ткани организма и углекислого газа из тканей в легкие.
Гемоглобин – это красный пигмент крови человека и животных. Подсчитано, что в одном эритроците содержится в среднем около 340 млн молекул гемоглобина. По своей химической структуре он представляет собой сложный белок, относящийся к гемопротеинам. В состав молекулы гемоглобина входят четыре субъеденицы, каждая из которых состоит из белковой части – глобина и небелковой части – гема. Молекула гема состоит из сложного гетероциклического соединения порфирина IХ, в центре которого находится двухвалентный атом железа, связанный с молекулой порфирина через атомы азота двумя валентными и двумя координационными связями. Степень окисления железа не изменяется ни при отдаче, ни при присоединении атома кислорода.
Рис. 1. Строение молекулы гемоглобина
Гемоглобины представляют собой тетрамерные белки, молекулы которых образованы различными типами полипептидных цепей, обозначаемых как б, в, г, д. В состав молекулы гемоглобина входят по 2 полипептидные цепи двух разных типов, каждая из которых связана с гемом.
У человека обнаружены гемоглобины различных типов, которые отличаются по химическому строению. В крови взрослого человека содержится гемоглобин А (HbA), состоящий из б2в2 цепей. В дополнение к основному типу гемоглобина HbA, в крови взрослого человека обнаружен гемоглобин A2 (HbA2). Также существует фетальный гемоглобин F (HbF), который называют гемоглобином новорожденных. В крови новорожденного ребёнка на долю фетального гемоглобина приходится около 80%. К концу первого года жизни ребёнка фетальный гемоглобин почти целиком замещается на гемоглобин А. Фетальный гемоглобин состоит из полипептидных цепей б2г2 и отличается от гемоглобина А вторичной, третичной и четвертичной структурами.
Наличие атома железа в составе гема придаёт молекуле гемоглобина характерную красную окраску. Присоединение к гему различных химических групп сопровождается изменением окраски, на чём и основаны колориметрические методы определение концентрации гемоглобина в крови.
Для стандартных лабораторных исследований концентрации общего гемоглобина в крови наиболее приемлемы колориметрические методы определения, как наиболее дешевые, простые и быстрые в исполнении. Также используются химические и спектрофотометрические методы определения, они имеют высокую точность, но в тоже время и более высокую сложность выполнения и стоимость анализа по сравнению с колориметрическими методами.
Наиболее старым методом определения содержания гемоглобина считается метод Сали – реакция гемоглобина с соляной кислотой с образованием солянокислого гематина. Метод основан на визуальном определении содержания гемоглобина путем сравнения окраски исследуемой пробы со стандартными растворами солянокислого гематина. Погрешность метода является достаточно большой, около 30%, на результаты определения влияют многие факторы: время реакции между гемоглобином и соляной кислотой, белковый состав крови, концентрация билирубина в крови.
В крови человека гемоглобин находится в основном в виде оксигемоглобина и восстановленного гемоглобина и в небольшом количестве – метгемоглобина, карбоксигемоглобина и вердоглобина. Каждая из упомянутых форм имеет свой световой спектр поглощения. При использовании колориметрических методов определения гемоглобина возникает проблема в выборе такого химического реагента, который бы превращал все виды гемоглобина только в один продукт реакции с единым спектром поглощения.
Рис. 2. Ход определения гемоглобина в крови колориметрическим методом
Колориметрическими методами, которые при фотометрическом определении имеют наименьшую ошибку и позволяют количественно перевести разные виды гемоглобина в одну форму, являются гемиглобинцианидный, гемихромный и гемиглобиназидный методы. В настоящее время в большинстве стран в качестве стандартного, как наиболее точный и надежный, признан гемиглобинцианидный метод определения концентрации гемоглобина.
Гемиглобинцианидный метод разработан в 1936 г Драбкиным и был одобрен Международным Комитетом по стандартизации в гематологии (ICSH) в 1963 г. Принцип данного метода основан на переводе всех видов гемоглобина в одну форму – гемиглобинцианид.
В ходе анализа образец крови помещают в трансформирующий раствор, который содержит феррицианид калия (железосинеродистый калий), цианид калия, дигидрофосфат калия и неионный детергент. Дигидрофосфат калия выполняет роль буфера, стабилизирующего значение рН раствора, при котором реакция проходит в течении нескольких минут. Детергент усиливает гемолиз эритроцитов и поддерживает белки плазмы крови в растворённом состоянии, что предотвращает помутнение раствора. Феррицианид калия окисляет все формы гемоглобина в метгемоглобин (гемиглобин), который при взаимодействии с анионами цианида образует гемиглобинцианид. Комплекс гемиглобинцианида окрашен в красный цвет, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе.
Существуют некоторые модификации состава трансформирующего реагента, в которых цианид калия заменяется на ацетонциангидрин, дигидрофосфат калия – на гидрокарбонат натрия, детергент отсутствует совсем.
Для гарантии точности метода применяют калибровочные растворы с точно установленной концентрацией гемоглобина. Калибровочные растворы гемоглобина – это высокоочищенные заменители крови человека, не содержащие примесей, искажающих результаты анализа. Существуют наборы контрольных растворов гемоглобина с различной концентрацией. Калибровочные растворы гемиглобинцианида получают, как правило, путем введения контрольного раствора в трансформирующий раствор. По данным измерения оптической плотности полученных растворов строят калибровочный график и проводят калибровку измерительного прибора.
Гемихромный метод является более современным методом определения гемоглобина, он отличается от гемиглобинцианидного метода отсутствием цианистых соединений в составе рабочего реагента и заменой их на более безопасные соединения. Гемихромный метод определения гемоглобина в крови разработан Ахрем А.А. с соавторами в 1986 г. Набор реагентов для определения гемоглобина в крови, основанный на данном методе, одобрен Комитетом по новой медицинской технике МЗ РФ и рекомендован к применению в клинико-диагностических лабораториях уже в 1998 г. гемоглобин кровь белок эритроцит
Принцип гемихромного метода основан на переводе всех форм гемоглобина в гемихром. В ходе анализа образец крови добавляют в трансформирующий раствор, который содержит жирные кислоты с феррицианидом калия или детергент додецилсульфат натрия (SDS), при этом происходит превращение гемоглобина в окисленную низкоспиновую форму – гемихром, имеющую красноватый цвет. Интенсивность окраски гемихрома прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе крови.
В перечисленных методах содержание гемоглобина в крови определяют путём измерения оптической плотности полученного раствора с помощью фотоколориметра при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр), а расчет концентрации производят по калибровочному графику.
В качестве аналитического оборудования используются фотометры со светофильтрами, спектрофотометры, фотоэлектрические гемоглобинометры, автоматические лабораторные анализаторы. Гемоглобинометры представляют собой полуавтоматические цифровые лабораторные анализаторы, в которых после измерения оптического поглощения анализируемого раствора на дисплее сразу выдается концентрация гемоглобина в граммах на литр крови.
При определении общего гемоглобина в крови материалом для исследования является свободнотекущая капиллярная или венозная кровь; в качестве антикоагулянтов добавляются ЭДТА, гепарин, оксалат аммония или оксалат калия. Нормальные значения концентрации общего гемоглобина составляют у мужчин 130-160 г/л; у женщин; 120-140 г/л.
Помимо определения концентрации общего гемоглобина в крови, существует необходимость определения малых количеств свободного гемоглобина в образцах плазмы капиллярной крови, сыворотки венозной крови, промывных жидкостях при проведении хирургических операций. Целью определения концентрации свободного гемоглобина является:
· количественная оценка внутрисосудистого гемолиза, который может приводить к развитию серьёзных заболеваний;
· оценка уровня гемолиза в донорской крови и ее компонентах;
· определение изменения уровня плазменного гемоглобина после воздействия различных факторов на организм человека;
· измерение уровня гемоглобина в ирригационных растворах при хирургических процедурах и операциях для определения уровня кровопотери.
Для определения свободного гемоглобина широкое применение нашел бензидиновый метод, который основан на окислении бензидина свободным гемоглобином в присутствии перекиси водорода.
В ходе анализа проба сыворотки крови вносится в раствор, который содержит бензидин, перекись водорода и ацетатный буфер для поддержания требуемого уровня рН. Измеряют показатель оптической плотности раствора на спектрофотометре при длине волны 600 нм. Раствор инкубируют в течение определённого времени при постоянной температуре. Далее проводят измерения повторно и по изменению величины оптической плотности вычисляют содержание свободного гемоглобина. Содержание свободного гемоглобина в сыворотке крови здоровых людей варьирует в пределах от 0,017 до 0,045 г/л.
На сегодняшний день при определении концентрации свободного гемоглобина используются более современные методы анализа, такие как метод сканирующей и термолинзовой спектрофотометрии. В клинической лабораторной практике применяются специализированные лабораторные анализаторы, которые позволяют измерять низкий уровень гемоглобина. Данные способы исследования высокотехнологичны, менее трудоёмки, обладают высокой точностью.
Размещено на Allbest.ru
Подобные документы
Особенности развития, строения, химического состава, обмена веществ и функций эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Существующие типы гемоглобина. Токсичные формы кислорода в крови человека. Основные составляющие антиоксидантной системы организма.
презентация [202,4 K], добавлен 18.05.2015
Транспортная функция крови. Соединение гемоглобина с газами, патологические соединения с кислородом. Помощь при отравлении угарным газом. Характеристика эритроцитов. Истинный (абсолютный) эритроцитоз. Факторы, влияющие на дифференцировку стволовой клетки.
презентация [236,8 K], добавлен 15.02.2014
Процессы энергетического метаболизма и основные энергетические параметры эритроцитов. Выяснение условий, при которых может происходить переход метаболизма эритроцитов из одной устойчивой точки в другую. Анализ строения и функций гемоглобина, эритроцитов.
дипломная работа [3,5 M], добавлен 17.10.2012
Особенности влияния рентгеновского излучения на гематологические показатели крови крыс на фоне приема различных штаммов спирулины и смеси витаминов. Влияние пищевых добавок на гематологические показатели крови у лабораторных животных при облучении.
курсовая работа [189,4 K], добавлен 22.09.2011
Содержание воды в организме человека. Кровь как разновидность соединительных тканей. Состав крови, ее функции. Объем циркулирующей крови, содержание веществ в ее плазме. Белки плазмы крови и их функции. Виды давления крови. Регуляция постоянства рН крови.
презентация [593,9 K], добавлен 29.08.2013
Объем крови в организме взрослого здорового человека. Относительная плотность крови и плазмы крови. Процесс образования форменных элементов крови. Эмбриональный и постэмбриональный гемопоэз. Основные функции крови. Эритроциты, тромбоциты и лейкоциты.
презентация [4,2 M], добавлен 22.12.2013
Количество крови у животных. Кровяное депо. Состав крови. Плазма. Сыворотка. Строение, функции, количество. Количество эритроцитов в крови. Необходимое условие образования и созревания эритроцитов. Фолиевая кислота. Истинный и относительный эритроцитоз.
реферат [22,6 K], добавлен 08.11.2008
Внутренняя среда организма. Система крови. Основы гемопоэза. Физико-химические свойства крови, состав плазмы. Резистентность эритроцитов. Группы крови и резус-фактор. Правила переливания крови. Количество, виды и функции лейкоцитов. Система фибpинолиза.
лекция [29,4 K], добавлен 30.07.2013
Понятие о системе крови. Органы кроветворения человека. Количество крови, понятия о ее депонировании. Форменные элементы и клетки крови. Функциональное значение белков плазмы. Поддержание постоянной кислотно-щелочного равновесия крови человека.
презентация [3,1 M], добавлен 29.10.2015
Общая характеристика крови, ее свойства (суспензионные, коллоидные, электролитные) и основные функции. Состав плазмы, строение эритроцитов и лейкоцитов. Факторы, обуславливающие разделение крови людей на группы. Особенности процесса кроветворения.
реферат [405,2 K], добавлен 25.12.2012
Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.
Загрузка...
